产品列表PRODUCTS LIST

首页 > 技术与支持 > Hela细胞的传代
Hela细胞的传代
点击次数:512 发布时间:2017-07-13

Hela细胞传代步骤
1.看培养基是否正常,细胞状态如何,细胞密度如何,决定是否传代。拿出来看的时候把盖子拧上。

2.热PBS、versene、培养基,(提前做好) 瓶子不要倒着放,不要让液体接触到瓶塞。

3. 打开超净台(先开风机,后开照明),用75%乙醇擦一下台面,点燃酒精灯。不要把废液缸拿出去倒,如果废液太多,可以用其他容器先装废液。
取小离心管一个,把离心管置于架子上。

4、取尖吸管、吸量管各一支,放置在专用的架上。放置的方式,注意前部分都不要与架子接触。

5、取待传代的细胞。打开versene。用酒精灯外阎烧。烧管子的时候,离酒精灯心远些,不要把渣滓带进去。把试剂拿入台子的时候,尽量平稳,不要让试剂碰到瓶口。

6、用吸量管吸取旧的培养基,置离心管中,吸量管加入versene,然后将versene瓶收起来。(加versene主要是为了将旧培养基洗去)。在离心管中间部分将液体加入。 吸液体和加液体时都不要对着细胞。

7、打开胰酶,然后将versene弃掉。换新管,用尖吸管吸取适量胰酶加入。加胰酶后,尽快放平,使细胞消化时间一致。

8、将细胞放入37度孵箱。放孵箱2min, 收胰酶,打开PBS。 之后拿出来镜下随时观察。使用二次消化法,去除容器中残余的细胞。别忘了用旧培养基中和。

9. 取细胞,镜下观察消化情况。消化程度合适之后(细胞变圆,但不漂起),用尖吸管弃去胰酶,取离心管中的培养基加入细胞,吹打,至所有细胞从培养皿底部脱落下来。用PBS洗细胞,versene对细胞有毒性,且不能被血清中和。然后吸取至离心管中,800 rpm离心5分钟。

11、吸量管吸取适量培养基加入新的培养皿中。

12、细胞离心毕,用吸新培养基的管弃去上清,先把泡沫吸走。换吸量管吸取培养皿中培养基适量,加入离心管,小体积混匀,将细胞重悬,尖吸管吹匀。

13.擦计数板,用枪吸10ul的液体,计数。不要把枪伸到离心管内。

14、吸量管吸取细胞悬液,加入新的培养皿中。镜下观察,摇匀,放入37度孵育。收超净台

联系人
在线客服
用心服务 成就你我
赌博导航线上评级_澳门赌博平台_澳门正规线上赌博_澳门赌博公司网站大全-上海子实