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细胞生长缓慢如何解决?
点击次数:178 发布时间:2019-06-05

1.检查你所培养的细胞是否存在污染。

 

(a)如果培养细胞未添加抗生素(必须添加?),细胞污染则是可能出现的。

(1)用肉眼和显微镜进行检查

(2)如果细胞被污染则要弃掉。

 

(b)由于支原体污染不容易觉察到,因此必须定期检测

 

(c)检测可能污染的途径和原因

 

2.检查你用于培养细胞的培养基和血清(例如:是否批次不同或厂商不同)。如果你常规使用的是粉剂或10X储存液,而现在购买的培养基更换为1X液体,而随后证明问题就出自于此,处理方法请参见下则分享内容。

 

3.如果问题与培养基无关,那么很可能还是细胞的问题。

 

(a)复苏另一支冻存的细胞,并且与正在培养的细胞加以比较。两种细胞的培养应分开,以免在培养之初就产生污染。随后按(b)~ (d)步的方法做排查。

 

(b)对传代培养的细胞进行计数,并绘制生长曲线与以前培养该细胞的资料进行比较,检在是否有下列改变:

(1)传代时是否接种密度过低。

(2)细胞传代是否过于频繁。

(3)传代前细胞平台期是否过长。

 

(c)是否更换了胰蛋白酶或其他分离剂的批号?检查批号和供应商。

 

(d)是否细胞分离过程中严重损伤了细胞?应检测:

(1)胰蛋白酶(其他消化试剂)消化时间是否过长。

(2)消化液的浓度和活性是否过高、过强。

(3)胰蛋白酶消化时、孵箱温度是否过高。

(4)吹打消化细胞时是否过于用力。

(5)细胞是否对EDTA过于敏感(如果添加了EDTA),

(6)胰蛋白酶稀释是否有误。

(7)是否使用了一批劣质的胰蛋白酶消化液。

 

二.问题较为普遍,其他人也遇到同样的困难

检查共用的设备和试剂

温室和孵箱温度

 

1.温度和温度设定不准。

(a)自动调温器损坏。

(b)开关孵箱门过于频繁。

(c)孵箱门未关紧。

(d)风扇损坏造成散热不均。

用便携式温度表重新标定孵箱温度。

 

2.孵箱湿度不能维持

(a)水盘中未加水,

(b)孵箱有渗漏。

(c)开关孵箱门过于频繁,

(d)在Petri培养皿中放置一定量的PBSA,每日称重,以检查蒸发率。

 

3.孵箱的C02浓度不准

(a)开关孵箱门过于频繁。

(b)CO2控制器出现问题。

 

4.用预先标定的培养基监测箱体内的PH。

 

5.用CO2探头(carborite)检测孵箱环境。

 

6.用标准混合气重新标定零值和CO2实际值。

 

三.实验室是否发生其他变化?

1.与细胞培养有关的人员是否改变?

(1)培养细胞人员是否发生增减

(2)准备实验人员是否发生增减

(3)实验人员的准备过程是否规范

(4)实验人员是否接受过系统训练

(5)实验空间和布局是否过于拥挤

 

2.细胞培养所需材料是否改变?

(1)供应商

(2)批号

(3)类型

(4)存储期限

 

3.细胞培养的操作过程是否有变化?

(1)孵育时间

(2)操作速度

(3)操作顺序

(4)位置

(5)范围大小

 

4.细胞培养的专业仪器设备是否完好?

(1)新近购置:是否新添仪器设备?

(2)运行状况:是否设备损坏?

(3)摆放位置:正在使用的仪器是否有足够的摆放空间,是否要移动邻近的仪器?

(4)操作温度:仪器是否在正常的温度范围内运转,你的样品是否也需此温度范围?

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