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请按SHG44细胞培养条件传代培养,步骤是这样子的
点击次数:120 发布时间:2019-06-24
     请按SHG44细胞培养条件传代培养,步骤是这样子的
  目前SHG44细胞冻存多采用甘油或二甲基亚砜作保护剂,这两种物质能提高细胞膜对水的通透性,加上缓慢冷冻可使细胞内的水分渗出细胞外,减少细胞内冰晶的形成,从而减少由冰晶形成的细胞损伤。
  1、10%的DMSO+90%胎牛血清。甘油一般用于菌种保存很少用于细胞冻存。
  2、取对数生长期的SHG44细胞,用胰蛋白酶把单层生长的细胞消化下来,悬浮生长的细胞则直接将细胞移至15ml离心管中。
  3、离心1000rpm,5min。
  4、去除胰蛋白酶及旧的培养液,加入适量配制好的冻存培养液,用吸管轻轻吹打使细胞均匀,计数,调节冻存液中细胞的zui终密度为5x10^6/ml~1x10^7/ml。
  5、在冻存管上标明细胞的名称,冻存时间及操作者。
  6、冻存:标准的冻存程序为降温速率-1~-2℃/min;当温度达到-25℃以下时,可增至-5℃~-10℃/min;到-100℃时,则可迅速浸入液氮中。也可将装有细胞的冻存管放入-20℃冰箱2h,然后放入-70℃冰箱中过夜,取出冻存管,移入液氮容器
  请按SHG44细胞培养条件传代培养。具体步骤如下:
  1)弃去培养液,用3mlPBS(不含钙,镁离子)洗1-2次;
  2)加1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于T25培养瓶中,倒转放于37度培养箱1-3分钟预热,然后又将培养瓶倒转大约30秒后,在倒置显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆分散,轻敲几下培养培养瓶,细胞随即脱落下来;
  3)加入6-8ml完全培养基,吸出,分到新的培养瓶中,按要求分瓶。
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