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收到L929细胞后的处理方法和培养操作步骤
点击次数:99 发布时间:2019-08-15
   收到L929细胞后的处理方法和培养操作步骤
  1948年三月建立了NCTCclone929(小鼠结缔组织),细胞系L的克隆。细胞系L是最早建立的连续培养细胞系之一,而clone929是最早的克隆株。从一只100日龄的雄性C3H/An小鼠的正常皮下疏松结缔组织入脂肪组织中建立了亲本细胞系L。第95代的细胞系L使用毛细管法分离单细胞建立了clone929。检测发现鼠痘病毒阴性。
  收到L929细胞后,要怎么样处理
  1)收到L929细胞后,请检查是否漏液,如果漏液,请拍照片发给我们。
  2)请先在显微镜下确认细胞生长状态,去掉封口膜并将T25瓶置于37℃培养约2-3h。
  3)弃去T25瓶中的培养基,添加6ml本公司附带的完全培养基。
  4)如果L929细胞密度达80%-90%请及时进行细胞传代,传代培养用6ml本公司附带的完全培养基。
  5)接到细胞次日,请检查细胞是否污染,若发现污染或疑似污染,请及时与我们取得联系。
  L929细胞培养操作
  1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。
  2)L929细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
  1.弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
  2.加1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
  3.按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
  4.将L929细胞悬液按1:2比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
  3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面T25瓶为类;
  1.L929细胞冻存时,弃去培养基后,PBS清洗一遍后加入1ml胰酶,细胞变圆脱落后,加入1ml含血清的培养基终止消化,可使用血球计数板计数。
  2.4min1000rpm离心去掉上清。加1ml血清重悬细胞,根据细胞数量加入血清和DMSO,轻轻混匀,DMSO终浓度为10%,细胞密度不低于1x106/ml,每支冻存管冻存1ml细胞悬液,注意冻存管做好标识。
  3.将冻存管置于程序降温盒中,放入-80度冰箱,2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
  以上便是今天关于收到L929细胞后的处理方法和培养操作步骤的全部分享了,希望对大家今后使用本设备能有帮助。
  
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